实验原理
本方法是一种固相抗原型酶联免疫法(enzyme linked immuno sorbent assay elisa),先将aba蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的aba(样品或标准品)和兔抗aba抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其与结合在固相aba上的抗体反应,zui后去除多余的未反应的酶标二抗,测定与固相结合的酶活性,酶活性和待测aba含量呈负函数关系,即固相aba结合的抗体与酶标二抗量(od或b%)随待测aba含量增加而减少,以一系列已知浓度的aba的od值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品b,只要在同样条件下测定反应后的od值,就可以从标准曲线上查到aba的量。
测定方法
1.包被：在微量滴定板内准确加入100μlaba包被液，37℃湿盒过夜。
2.标样稀释：取8支试管每管加150μldb，*管中加入50μl（2000ng/50μl）标准液，充分涡旋后，取50μl至第二号管中，同样涡旋后，取50μl到第三管；依次稀释到第六管，稀释后的标准aba依次为1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μl。
3. 洗板：从37℃湿盒中取出滴定板，恢复到室温后，弃去包被液，用wb（洗涤缓冲液）洗涤三次，甩干（吸水纸）。
4.加样：1～8孔对应加入aba标样50μl，10号孔相应加入zui浓aba标样，9号孔加50μldb，三排重复；然后每孔加50μl抗体，37℃ 45分钟。
5.洗板：
6.加酶标二抗：每孔加100μl，37℃反应1小时。
7.洗板：
8.显色：各孔加10μlopd显色液，37℃ 20分钟。
9.终止反应：各孔加50μl 6nh2so4。
10.读数：490nm读取od值。其中10号孔调零,而9号孔为zui大值(b0),1~8号孔的od值为b。
11.结果计算：以in（b/b0）∕（1－b/b0）为纵坐标，以标准aba浓度的常用对数（lg［aba］）为横坐标,绘制曲线。
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